จะหลีกเลี่ยงความเข้าใจผิดทั่วไปในการใช้เคล็ดลับปิเปตที่มีผลผูกพันต่ำได้อย่างไร?

เคล็ดลับปิเปตที่มีผลผูกพันต่ำ สามารถลดการตกค้างตัวอย่างได้อย่างมีนัยสำคัญเนื่องจากการออกแบบพื้นผิวภายในที่ไม่ชอบน้ำและเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการจัดการรีเอเจนต์ที่มีราคาแพงของเหลวที่มีความหนืดหรือตัวอย่างติดตาม (เช่นโปรตีนและกรดนิวคลีอิก) อย่างไรก็ตามหากพวกเขาไม่ได้ทำงานอย่างถูกต้องพวกเขาอาจยังคงส่งผลกระทบต่อความแม่นยำและความสามารถในการทำซ้ำของการทดลอง ต่อไปนี้คือการวิเคราะห์ข้อผิดพลาดทั่วไปและวิธีแก้ปัญหาที่ใช้ร่วมกับข้อกำหนดการดำเนินงานในห้องปฏิบัติการ:

ความเข้าใจผิด 1: เพิกเฉยต่อการล้างปลายของปลาย

การดำเนินการที่ไม่ถูกต้อง: สำลักตัวอย่างโดยตรงและละเว้นขั้นตอนการล้างก่อน

ผลกระทบ: แม้ว่าเคล็ดลับปิเปตที่มีผลผูกพันต่ำสามารถลดสารตกค้างได้สำหรับตัวอย่างเช่นซีรั่มโปรตีนหรือตัวทำละลายอินทรีย์ผนังด้านในของพวกเขาอาจยังคงเป็นฟิล์มไมโคร-ของเหลวเนื่องจากแรงตึงผิวส่งผลให้ปริมาตรปิเปตเริ่มต้นต่ำ

วิธีการที่ถูกต้อง: ก่อนปิเปตอย่างเป็นทางการให้ทำซ้ำการดับลง 2 ถึง 3 ครั้งด้วยตัวอย่างเดียวกันเพื่อสร้างชั้นฟิล์มเหลวที่มั่นคงบนผนังด้านในของปลาย (ยกเว้นของเหลวอุณหภูมิสูง/อุณหภูมิต่ำ)

ความเข้าใจผิด 2: ความเร็วความทะเยอทะยานเร็วเกินไปหรือเอียงมุมเอียง

การดำเนินการที่ไม่ถูกต้อง: สำลักของเหลวอย่างรวดเร็วหรือปิเปตจะเอียงมากกว่า 20 °
ผลกระทบ:

ปิเปตเร็วเกินไป: ฟองหรือการดูดด้านหลัง (ของเหลววิ่งเข้าไปในปิเปตและปนเปื้อนลูกสูบ);
PIPETTE TILTED: เปลี่ยนความดันพื้นผิวของเหลวส่งผลให้ปริมาตรปิเปตที่ไม่ถูกต้องและปริมาณที่เหลือเพิ่มขึ้น วิธีการที่ถูกต้อง:
ปิเปตช้าและปล่อยช้า: ทำงานด้วยความเร็วคงที่และควบคุมความเร็วการปล่อยลูกสูบ
ถือในแนวตั้ง: รักษามุมเอียง≤20°เมื่อปลายปิเปตถูกแช่อยู่ในพื้นผิวของเหลว
ความเข้าใจผิด 3: เพิกเฉยต่อความแตกต่างในการดำเนินงานของของเหลวที่มีความหนืด
การดำเนินการที่ไม่ถูกต้อง: ใช้ความเร็วปิเปตเดียวกันกับของเหลวธรรมดาสำหรับตัวอย่างความหนืดสูง (เช่นกลีเซอรอลและสารแขวนลอยของเซลล์)
ผลกระทบ: ของเหลวที่มีความหนืดไหลอย่างช้าๆบนผนังด้านในของปลายปิเปตและการปล่อยอย่างรวดเร็วจะทำให้ปริมาณที่เหลือเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญการชดเชยข้อดีของการออกแบบการดูดซับต่ำ
วิธีการที่ถูกต้อง:

ขยายเวลาแช่: อยู่ในพื้นผิวของเหลวเป็นเวลา 1 วินาทีหลังจากการดูดซับก่อนที่จะถอดออกและหยุดชั่วคราวเป็นเวลา 1 วินาทีก่อนที่จะกดเกียร์ที่สองเพื่อเป่าของเหลวเมื่อปล่อยออกมา;
เลือกเคล็ดลับปิเปตแบบปากกว้าง: สำหรับ macromolecules หรือตัวอย่างเซลล์ให้ใช้ปลายปิเปตดูดซับต่ำในปาก (ใหญ่กว่ารูรับแสงมาตรฐาน 70% เพื่อลดแรงเฉือน
ความเข้าใจผิด 4: กดปุ่มอย่างหนักเมื่อติดตั้งปลาย
การดำเนินการที่ไม่ถูกต้อง: กดปุ่มที่จับปิเปตซ้ำ ๆ เพื่อ "กระชับ" ปลาย
ผลกระทบ: ผลกระทบระยะยาวจะสวมใส่ส่วนประกอบการปิดผนึกปิเปตทำลายความรุนแรงและทำให้เกิดข้อผิดพลาดในการรั่วไหลหรือปริมาตร
วิธีที่ถูกต้อง: ใส่ปิเปตในแนวตั้งลงในปลายกดเบา ๆ และหมุนไปทางซ้ายและขวาเล็กน้อยเพื่อให้พอดี

ความเข้าใจผิด 5: ที่เก็บข้อมูลที่ไม่ถูกต้องหรือนำกลับมาใช้ใหม่
การดำเนินการผิด:

ใส่ปิเปตแบนเมื่อมีของเหลวตกค้างอยู่ในปลาย
นำเคล็ดลับการดูดซับต่ำที่ใช้แล้วทิ้งเพื่อประหยัดค่าใช้จ่าย ผลกระทบ:
การวางราบทำให้เกิดการไหลย้อนกลับของของเหลวเพื่อกัดกร่อนสปริงลูกสูบ
การใช้ซ้ำอาจส่งผลกระทบต่อความแม่นยำเนื่องจากการปนเปื้อนข้ามหรือการเสียรูปแบบโครงสร้าง วิธีที่ถูกต้อง:
ทิ้งปลายทันทีหลังจากปิเปตและแขวนปิเปตในแนวตั้ง
การใช้ซ้ำเป็นสิ่งต้องห้ามอย่างเคร่งครัดโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อพูดถึงการทดลองที่ละเอียดอ่อนเช่น PCR และไอโซโทป
คำแนะนำอย่างมืออาชีพ: เพิ่มข้อดีของเคล็ดลับการเก็บรักษาต่ำให้สูงสุด
จับคู่คุณสมบัติของของเหลว:
ของเหลวระเหย (เช่นคลอโรฟอร์ม): หลีกเลี่ยงการใช้เคล็ดลับการทนทานต่ำทั่วไปและใช้เคล็ดลับที่ปลอดภัยของตัวทำละลายหรือปิเปตลูกสูบภายนอกที่ออกแบบมาสำหรับรีเอเจนต์ระเหย
การตรวจสอบการสอบเทียบ:
ชั่งน้ำหนักอย่างสม่ำเสมอน้ำหนักของปิเปตน้ำบริสุทธิ์ด้วยความสมดุลในการวิเคราะห์ (1ml = 0.9982G ที่ 20 ℃) ​​เพื่อตรวจสอบว่าปริมาณจริงเป็นไปตามมาตรฐานหรือไม่
สรุปประเด็นสำคัญ: เคล็ดลับการทนทานต่ำปรับปรุงความแม่นยำโดยการลดการสูญเสียตัวอย่าง แต่หากรายละเอียดของการดำเนินการถูกละเว้นมันอาจยังคงตอบโต้ได้ การติดตั้งที่ได้มาตรฐานการควบคุมความเร็วการปรับตัวให้เข้ากับลักษณะตัวอย่างและการใช้ครั้งเดียวอย่างเข้มงวดเป็นพื้นฐานสำหรับการบรรลุการทดลองทำซ้ำที่สูง